急性髓系白血病（AML）治疗的关键，在于彻底清除体内残留的白血病细胞。诱导化疗后骨髓中残存的微量病灶（这里叫作可测量残留病灶，MRD）与不良预后密切相关，其检测结果直接影响异基因造血干细胞移植等后续治疗决策。
然而全光谱流式可将19至29色抗体整合进单管，但临床落地的问题在于：光谱解析依赖高质量单染对照，补偿微球的光谱特征与生物细胞存在差异，而正常骨髓+白血病细胞系的细胞对照又难以标准化。为此，德国汉诺威医学院联合荷兰阿姆斯特丹UMC团队，在此前19色单管方案基础上重新设计了一套22色单管MRD panel，核心目标是：从panel设计之初即嵌入以外周血白细胞（PBL）为通用unmixing对照的策略，同时整合细胞活性、血液稀释（CD16）与LSC检测功能。
本次研究使用Cytek Northern Lights CLC（3激光V-B-R配置）上完成全部22色检测。Panel保留EuroFlow验证的抗体克隆，新增CD16（用于血液稀释评估）、CD123与CD45RA（LSC检测）及Zombie NIR活性染料，并将CD34、CD117、CD133等原始标志物调整至非串联荧光素（BV421、PE、APC）。
最大的创新在于对照策略：由于外周血几乎不表达CD34/CD117/CD133，研究者采用"CD14替代法"——以相同荧光素标记的CD14抗体染色外周血单核细胞（其自发荧光谱与骨髓原始细胞接近），生成高质量单染对照；其余标志物则直接以单染PBL为对照。这意味着任何实验室仅凭常规外周血即可完成光谱解析，无需骨髓参考样本或细胞系，为标准化扫清了最大障碍。
图1 .22色panel清晰解析正常骨髓各造血细胞群体（UMAP/FlowSOM分析）
准确解析：PBL替代对照与传统"骨髓+细胞系"对照的unmixing矩阵差异极小，补偿调整均在±3%预设标准内。
灵敏线性：KG-1细胞稀释实验中，4种常规LAIP的定量下限（LoQ）最低达0.008%，满足欧洲白血病网（ELN）0.01%的灵敏度要求；预期与实测浓度线性相关R²>0.98。
稳定精密：批内、批间变异系数（CV）均小于20%，符合临床可接受标准。
质控加分：CD16可识别外周血混入造成的样本稀释——稀释会显著低估WBC-MRD，而原始标志物MRD（PM-MRD）结果保持稳定，为结果判读加上"安全锁"。
高度一致：初诊AML样本掺入实验R²>0.99；18例冻存MRD样本PM-MRD分析R²=0.93；5例新鲜临床样本的MRD阴/阳性判定与5管金标准完全一致（R²=0.9964）。22色panel还额外检出6种因多管分管而被遗漏的LAIP组合。
图2 .KG-1稀释实验：LAIP检测线性优异（R²>0.98），LoQ最低达0.008%
图3.血液稀释显著低估WBC-MRD（红），PM-MRD保持稳定（紫）
图4 .新鲜AML MRD样本：22色单管法与5管金标准高度一致（R²=0.9964）
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全光谱采集，单管多色：完整捕获每种荧光素的发射光谱特征，使22色单管检测成为现实，大幅节省样本与试剂成本，并让以往分散于多管的标志物组合得以同管评估。
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高灵敏、低噪声：支持低至0.008%的稀有事件定量，满足MRD检测对灵敏度的严苛要求。
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临床认证：仪器与SpectroFlo CLC软件专为临床诊断场景设计，配合每日QC微球质控，保障结果可重复、可追溯。
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灵活可扩展：该panel复杂度指数仅8.19，光谱图仍留有"空位"，可容纳至少4个额外荧光素，便于未来纳入TIM-3、CLEC12A等新兴MRD/LSC标志物。
这个研究证明：基于PBL的通用解混策略与22色单管设计相结合，使光谱流式MRD检测在灵敏度、特异性与功能拓展上全面比肩乃至超越传统5管法。
Cytek Northern Lights CLC凭借全光谱技术与临床级设计，正在为AML MRD诊断的标准化与普及铺平道路。
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1、Waclawski JP, et al. A Clinically Applicable Unmixing Approach for Spectral MRD Detection in AML. Cancers. 2026;18(14):2323.
